一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為動物源性食品(動物肌肉和肝臟)中克倫特羅(clenbuterol)、沙丁胺醇(salbutamol)、萊克多巴胺(ractompamine)等3種β-受體激動劑的樣本前處理凈化方法，HPLC法作為檢測手段。SimplyGreen MCX(60mg/3mL)柱凈化效果良好，回收率滿足測試要求，重現性好，與知名廠商同型號柱性能相當。
二、實驗目標物
克倫特羅(CAS:37148-27-9)、沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)、萊克多巴胺(CAS:97825-25-7)。
三、應用范圍
本方法適用于動物源性食品(動物肌肉和肝臟)中克倫特羅(Clen)、沙丁胺醇(Sal)、萊克多巴胺(Rac)等3種β-受體激動劑殘留藥 物的檢測。
四、參考標準
《GB/T 22286-2008 動物性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定
液相色譜串聯質譜法》。
五、實驗材料
SimplyGreen MCX固相萃取柱60mg/3mL
六、實驗方法
1、樣品提取
稱取2±0.01 g經搗碎的豬肉樣品，于50
mL離心管中，加8 mL乙酸鈉緩沖液(0.2 mol/L，pH5.2)，振蕩提取15 min， 4000 r/min離心10 min，取上清液4 mL于50 mL離心管中，并加入0.1mol/L高氯酸溶液5 mL，混合均勻，用高氯酸調節pH到1±0.3。4000 r/min離心10
min后將全部上清液轉移到50 mL離心管中，用10
mol/L氫氧化鈉溶液調節pH到11。加入10 mL飽和氯化鈉和10 mL異丙醇-乙酸乙酯(6:4, v/v)混合溶液，充分提取5 min，在4000 r/min離心10 min。
轉移全部有機相，在40 ℃水浴下氮吹干。加入5 mL乙酸鈉緩沖液(0.2 mol/L，pH5.2)，超聲混勻，使殘渣充分溶解后備用。
2、SPE柱凈化
(1) 活化：MCX柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化。
(2) 上樣和洗脫：取上述殘渣溶液上柱，控制流速0.5 mL/min。后依次用2 mL水、2 mL 2%甲酸水、2 mL甲醇淋洗柱子并抽干，然后用2 mL5%氨化甲醇溶液洗脫柱子上的待測成分。
(3) 重新溶解：收集洗脫液，于40℃氮氣吹干，準確加入1.0 mL 0.1%甲酸/水-甲醇 (95:5，v/v)溶液溶解殘余物，0.22 μm濾膜過濾，供高效液相色譜測定。
3、HPLC條件
設備：Waters Alliance 2690 色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6mm Id，5 μm) 檢測器：紫外249nm，熒光激發波長226nm，發射波長306nm
流動相：A:甲醇 B:0.1%甲酸水溶液 洗脫方式：梯度洗脫
表1梯度洗脫條件
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時間/min
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A/%
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B/%
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0.0
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10
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90
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80.
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48
|
52
|
|
15.0
|
48
|
52
|
|
15.1
|
10
|
90
|
|
22.0
|
10
|
90
|
流速：1.0 mL/min
柱溫：30 ℃
進樣量：20 μL
七、實驗結果
1、添加水平為1.0mg/kg豬肉基質中克倫特羅(Clen)、沙丁胺醇(Sal)、萊克多巴胺(Rac)等3種
β-受體激動劑的添加回收結果
表2 添加水平為1.0mg/kg豬肉基質中3種β-受體激動劑的添加回收結果
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名稱
|
回收率（%）
|
平均回收率（%）
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RSD（%）
|
|
1
|
2
|
3
|
|
克倫特羅(Clen)
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85
|
88.4
|
89.4
|
87.6
|
2.6
|
|
沙丁胺醇(Sal)
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84.4
|
85.4
|
88.2
|
86.0
|
2.3
|
|
萊克多巴(Rac)
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85.0
|
86.6
|
88.4
|
86.7
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2.0
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表3 W品牌同型號柱，添加水平為1.0mg/kg豬肉基質中3種β-受體激動劑的添加回收結果
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名稱
|
回收率（%）
|
平均回收率（%）
|
|
1
|
2
|
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克倫特羅(Clen)
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79.9
|
78.4
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79.2
|
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沙丁胺醇(Sal)
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86.4
|
84.6
|
85.5
|
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萊克多巴(Rac)
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86.9
|
81.8
|
84.4
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2、添加水平為1.0mg/kg豬肉基質中三種β-受體激動劑檢測色譜圖
圖1 沙丁胺醇和萊克多巴胺的熒光色譜圖
圖2 克倫特羅的紫外色譜圖
