一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
羅丹明B(CAS:81-88-9)。
三、應用范圍
本方法適用于進出口食品中羅丹明B的檢測的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《SN/T 2430-2010 進出口食品中羅丹明B的檢測方法》。
五、實驗材料
SimplyGreen Al2O3－N中性氧化鋁萃取柱1g/6mL。
六、實驗方法
1、樣品提取
稱取辣椒粉2 g(精確至0.01)于50 mL離心管中，準確加入20
mL 20%丙酮正己烷，于渦旋混勻器上混合提取 2 min，再超聲提取15 min，于4000 r/min離心5
min，上清液過濾待凈化。
2、SPE柱凈化
(1)活化：中性氧化鋁柱使用前使用6 mL正己烷活化。
(2)上樣和洗脫：取待凈化液10
mL加入中性氧化鋁小柱，1滴/秒流速通過中性氧化鋁小柱后，棄去溶液，加入10 mL 丙酮-正己烷溶液(20:80,
v/v)淋洗，棄去淋洗液，抽干小柱。取10 mL 2%氨水甲醇溶液洗脫小柱，收集洗脫液，洗脫液于50 ℃氮吹至干。
(3)重新溶解：用1 mL甲醇定容，0.22 μm微孔濾膜過濾，供HPLC上樣測試。
3、HPLC條件
設備：Waters
Alliance 2690 色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm) 檢測器：Waters 2475 熒光檢測器，激發(fā)波長(Ex)550 nm，發(fā)射波長(Em)580 nm 流速：1 mL/min
進樣體積：2 0 μL
流動相 A：純水流動相
B：甲醇洗脫方式：等度洗
表1 等度洗脫條件
七、實驗結果
1、 25μg/kg辣椒粉中羅丹明B的添加回收結果
表2 25μg/kg辣椒粉中羅丹明B的添加回收結果
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目標物
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回收率（%）
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平均回收率（%）
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RSD（%）
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1
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2
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3
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羅丹明B
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86
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88
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88
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87.33
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1.32
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2、 添加水平為25μg/kg辣椒粉中羅丹明B檢測色譜圖
圖1 添加水平為25μg/kg辣椒粉中羅丹明B檢測色譜圖
