本研究利用固相萃取法作為樣品前處理方法，HPLC法作為檢測(cè)手段。該方法操作方便，可簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

氫化可的松(CAS:50-23-7)。

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于牛奶中氫化可的松的檢測(cè)及確證。

四、實(shí)驗(yàn)材料

SimplyGreen Silica固相萃取柱500mg/6mL

五、實(shí)驗(yàn)方法

1、樣品提取

稱取牛奶試料5 g于50 mL離心管中，加30 mL乙酸乙酯，均質(zhì)1 min，350 r/min搖床振動(dòng)20 min，4200 r/min離心10 min，移取乙酸乙酯層。殘?jiān)屑右宜嵋阴?5 mL，均質(zhì)1 min，350 r/min搖床振動(dòng)20 min，4200 r/min離心10 min，移取乙酸乙酯層。合并兩次提取液，40 ℃旋轉(zhuǎn)至近干，加乙酸乙酯1 mL和正己烷5 mL，溶解殘?jiān)?，待凈化?

2、SPE柱凈化

(1)活化：用6 mL正己烷活化Silica固相萃取柱。
(2)上樣和洗脫：取待測(cè)液，通過(guò)Silica固相萃取小柱富集，棄去流出液。用6 mL正己烷淋洗固相萃取柱，真空抽干5 min，棄去流出液。用6 mL正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脫萃取柱，收集洗脫液。
(3)重新溶解：洗脫液于40 ℃氮?dú)獯蹈?，?0%乙腈水溶液2.0 mL溶解殘余物，過(guò)0.22 μm濾膜，供高效液相色譜測(cè)定。

3、HPLC條件

設(shè)備：Waters Alliance 2695
檢測(cè)器：Waters 2487 雙波長(zhǎng)檢測(cè)器
檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流動(dòng)相：A：乙腈         B：0.1%甲酸水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1  梯度洗脫條件